나팔꽃 조직배양 실험보고서 | MS배지 | 종자세척

 

목차

1. ms배지란
  1.1 ms배지의 성분
  1.2 ms배지 조제과정

2. ms배지에 종자심기
  2.1 종자 세척하는 방법
  2.2 종자심기
  2.3 경과

3. 순화
  3.1 순화의 목적
  3.2 나팔꽃 순화 과정

4. 캘러스 유도 및 증식
  4.1 캘러스란
  4.2 캘러스와 세포배양
  4.3 식물조직배양실 및 실험실 구성
  4.4 캘러스 만드는 과정
  4.5 캘러스가 자라는 과정

5. 실험 후기

6. 참고자료

---

1. ms배지란

무라시게 스쿠그 배지 (Murashige & Skoog)라고 하는데, 물시게와 스쿠그에 의해 담배속 조직과 캘러스의 증식을 지표로 해서 개발한 배지이다. 현재는 담배뿐만 아니라 많은 식물조직이나 원형질체들의 배양에도 사용하고 있는 범용의 완전합성배지 중 하나이다. 이 배지에는 무기질소원으로서 NK4NO3가 다량 존재하여 질소농도가 높은 것이 특징이다.

  1.1 배지의 성분

미생물 중에는 탄소원으로 탄산가스, 질소원으로 공기중의 질소를 이용할 수 있는 것이 있으나, 일반적으로 탄소원은 당류, 유기산에서 질소원으로는 무기, 유기 질소화합물을 요구함과 동시에 각종 무기염류를 필요로 한다.

• 탄소원 : 대부분 Glucose와 Sucrose를 가장 많이 사용한다. 미생물의 종류와 목적에 따라 Fructose, maltose, lactose 전분등의 당류와 사과산, 구연산, 주석산 등으 ㅣ유기산 및 분자량이 작은 지방산 등이 사용된다.
• 질소원 : 질소원은 단백질 합성에 이용된다. 미생물은 암모니움염이나 질산염 등의 무기태질소를 이용할 수 있으나, 미생물의 종류에 따라 아미노산이나 Peptone등의 유기태질소를 요구하는 것도 있다.
• 무기염류 : 무기염은 균체의 구성성분으로 이용되기도 하고, 배지의 pH, 삼투압의 조절에도 중요한 작용을 한다. 병원균의 배양에 필요한 주요 무기염은 P, Na, K, Mg, S, Fe, Cl 이며 Co, Ms, Zn, Cu 등을 필요로 하는 것도 있다.
• 생장소 : 대부분의 미생물은 비타민 등 생장소를 합성하지만 일부는 체내에서 합성하지 못해 배지에 미량의 생장소를 첨가해주어야 한다. 순수한 합성배지엔느 생장소를 첨가하지 않으면 많은 미생물이 생육할 수 없다.
• 기타 첨가물 : 한천(agar)은 배지를 고체 상태로 만들기 위해 첨가. 0.6~1%이내 농도 범위에서 사용한다.
• 활성탄 : 배지를 검게 만들어 배지의 온도상승 및 배지내의 해로운 물질을 흡수한다. 그러나 활성탄이 배지 내에 첨가된 생장조절제를 흡수하면 오히려 부작용을 일으킬 수 있다.

MS배지의 성분

  1.2 ms배지 조제과정

용액을 비율대로 섞고 슈크러스트를 넣은 유리병에 섞은 용액을 옮긴다. 만든 배지를 Autoclave를 이용하여 고온에서 살균한 후 실온에서 서서히 식힌다. 식은 배지를 소독된 용기에 같은 용량으로 나눠 담는다.

 

2. ms배지에 종자심기

무균상태로 종자를 키우기 위해서는 배지뿐만 아니라 종자도 세척하여 무균상태로 만들어야 한다.

  2.1 종자 세척하는 방법

①소독

70%   Etoh         1 minute       
           DW          1 minute
70%   Etoh         1 minute
          DW          1 minute
4%   Naclo         10 minute
         DW          1 minute
2%   Naclo         10 minute
         DW          1 minute
         Dry           30minute

② washing
       DW          20 minute
       DW          1  minute
       DW          10 minute
       DW          1  minute
       Dry          30 minute

종자가 오염되지 않도록 손을 알콜로 소독한 후 클린벤치에서 세척한 종자를 소독한 핀셋으로 배지에 심는다.

  2.2 종자심기

 

4/12

종자를 세척하여 심은지 하루가 경과되었는데 싹이 트기 시작했다.

4/14

3일 경과한 모습인데 하루차보다 조금 더 진전되었다. 

  2.3 경과

 

4/19

일주일 경과- 줄기와 잎이 자라난 모습.

4/20

4/21

전보다 잎의 크기와 줄기 뿌리 모두 자란 상태가 관찰된다.

4/25

잎 크기가 21일보다 두 배정도 커졌고 뿌리와 줄기도 많이 자란모습.

4/26

많이 자라난 모습. 하나의 배지는 오염되어 곰팡이가 펴서 폐기했다.

4/27

배지에 꽉 찰정도로 자라난 모습. 순화를 시켜야한다. 대체로 뿌리와 줄기가 가늘고 길었으나 한 배지의 나팔꽃은 줄기와 뿌리가 두껍고 뭉툭했다.